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RT-PCR技術(shù)服務(wù)
RT-PCR技術(shù)服務(wù)
更新時(shí)間:2022-10-19
訪(fǎng)問(wèn)量: 4994
廠(chǎng)商性質(zhì): 生產(chǎn)廠(chǎng)家

RT-PCR技術(shù)服務(wù)
1、引物設計合成(人、大鼠、小鼠、兔等)
2、基因表達水平檢測、內參檢測
3、SNP檢測服務(wù)
4、甲基化檢測服務(wù)
5、測序技術(shù)服務(wù)
6、芯片檢測(全基因、MicroRNA)
7、染色體分析

RT-PCR技術(shù)服務(wù)產(chǎn)品概述:

反轉錄PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一種從RNA擴增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對于獲得與克隆mRNA的5’、3’末端序列和從非常少量的mRNA樣品構建大容量的cDNA文庫方面都是極為靈敏與通用的方法。此外,RT-PCR還易于鑒定已轉錄序列是否發(fā)生突變及呈現多態(tài)性,還可用于測定基因表達的強度。我公司采用二步RT-PCR法,可滿(mǎn)足客戶(hù)不同的實(shí)驗要求。
樣品要求:提供的樣品要新鮮并盡可能多,不推薦提供RNA樣品,或者提供cDNA,并盡可能詳細的提供背景資料(基因序列、Genebank accession number擴增產(chǎn)物的用途等)。


RT-PCR技術(shù)服務(wù)?基本步驟:
● 模板制備:見(jiàn)RNA提取技術(shù)服務(wù)。
● 引物設計
    客戶(hù)提供上、下游引物,或者我公司提供免費的引物設計及合成(包括RT-PCR半定量檢測中的內參引物)。
● 反轉錄
(1)Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。

 

 試劑名稱(chēng)  使用量
 模板RNA  2μg
 Oligo(dT)12-18 Primer(50μM)  2.5μl

(2)70℃保溫5分鐘后迅速在冰上急冷2分鐘以上。 
(3)離心數秒鐘使模板RNA/引物的變性溶液聚集于Microtube管底部。 
(4)在上述Microtube管中配制下列反轉錄反應液。

 

 試劑名稱(chēng)  使用量
 上述模板RNA/引物變性溶液  
 5×M-MLV Buffer  5μl
 dNTP Mixture(各10 mM)  1.25μl
 RNase Inhibitor(40 U/μl )  25U
 M-MLV(200 U/μl )  200U 
 RNase free dH2O  up to 25μl

42℃保溫1小時(shí)。 
(5)70℃保溫15分鐘后冰上冷卻,得到cDNA溶液。
若需要表達,參考基因表達服務(wù)。若需要進(jìn)行RT-PCR半定量分析,接著(zhù)以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR擴增目的基因及看家基因,產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳后進(jìn)行灰度掃描分析。

RNA模板的制備需另收費(見(jiàn)RNA提取服務(wù))以上為1個(gè)目的基因的報價(jià)。進(jìn)行相對定量分析時(shí),同一材料的多個(gè)目的基因的價(jià)格=1個(gè)目的基因價(jià)格×目的基因個(gè)數。
提供結果
完整的實(shí)驗操作步驟、電泳圖、定量分析結果等。

RT-PCR技術(shù)服務(wù)參照:

 

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